大多數培養基需要在121℃下高壓滅菌15-30分鐘，只有少數介質需要加熱溶解而不需要高壓滅菌。特別是無菌試驗中培養基滅菌不徹底直接關系到檢測結果。因此，有必要對高壓滅菌器的滅菌效果進行驗證。
1試驗數據
（1）嗜熱脂肪芽孢桿菌圓盤。嗜熱脂肪芽孢桿菌atcc7053是該方法常用的生物指示劑，其孢子大小為5-l05 CFU/片。
（2） 121℃壓力蒸汽滅菌化學指示卡。
（3） 溴甲酚紫蛋白胨水培養基在116℃滅菌20min后使用。
（4） 0-150℃保溫溫度計。
2方法與結果
用無菌鑷子將嗜熱脂肪芽孢桿菌圓盤（以下簡稱菌片）放入密封試管中。將化學指示卡和保留溫度計放入開口管中。制備5-10份上述兩種試管。單獨放置在高壓滅菌器蒸氣口、底部排氣口和底部出水處，或上下左右各5個中心。如果高壓滅菌器為兩層，應放置在10處。
保留點溫度計應經標準化合格后方可用于檢定試驗。測試前，溫度計的水銀柱應在40℃以下搖晃。每次監測后，溫度計的溫差應保持在1℃之間，說明高壓滅菌器內溫度分布均勻。
滅菌片應置于滅菌的溴甲酚紫蛋白胨水介質中，嚴格無菌操作條件，在56～60℃下培養24～48h，觀察顏色變化。如果培養基變黃，說明平板中的嗜熱脂肪芽孢桿菌尚未完全滅活，細菌仍能在培養基中生長，分化為葡萄糖，產酸變黃。如果培養基的基本顏色仍然是紫色，說明孢子已經失活。同時，未滅菌紙應作為陽性對照放入培養基中，空白紙無紙作為陰性對照。
化學指示卡上的色塊在高壓滅菌時由淺黃色變為黑色。通過顏色的變化，并與對照色進行比較，判斷滅菌效果是否符合要求。化學指示卡應保存在干燥的地方。遇潮變色，影響滅菌效果觀察。
高壓蒸汽滅菌必須使蒸汽順利進入高壓滅菌器，接觸滅菌物品，排出原有冷空氣。應驗證空載熱擴散和滿載熱穿透（不超過滿載時總體積的2/3）。這兩個試驗重復三次，共六次。5個點6次試驗結果表明，溫度為121℃，化學指示卡變黑，程度與對照顏色一致，培養基顏色無變化，說明高壓蒸汽滅菌合格。
高壓滅菌器屬于強制檢測儀器，但強制檢測只檢測儀器的物理參數。因此，有必要對經過嚴格測試的高壓滅菌器的滅菌效果進行驗證。有些單位經常忽視這個重要問題。市場上銷售的手提式滅菌器往往指針達到要求的溫度，但滅菌物品的實際溫度卻不符合要求。導致滅菌不徹底，影響檢測結果。培養基滅菌不徹底影響培養基的使用和結果的判斷。因此，有必要對高壓滅菌器的無菌效果進行驗證。